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人源CerS2重组腺病毒构建及其对肝癌细胞HepG2细胞周期的作用

杨小理;钱玥;欧阳旭红;向加林;杨艳;王凤学;遵义医学院附属医院医学检验科;遵义医学院检验医学院;贵州省遵义市第一人民医院检验科;

摘要: 目的探讨神经酰胺合酶2(CerS2)过表达对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及可能机制。方法化学合成人源CerS2基因CDS区并构建重组穿梭质粒pDC315-CerS2-绿色荧光蛋白(GFP),采用Admax系统将成功构建的CerS2重组穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞,通过Cre/loxP实现重组,并进行扩增、纯化及滴度测定。将正确构建的Adv-CerS2-GFP重组腺病毒与空载分别感染肝癌细胞HepG2(即对照组、空载组、实验组),激光共聚焦显微镜定位CerS2-GFP融合蛋白的表达,流式细胞术PI法检测各组细胞周期的分布;RT-qPCR、Western blot法检测各组细胞CerS2、p27mRNA及蛋白表达水平。结果经测序分析验证重组腺病毒构建成功。HepG2实验组CerS2、p27mRNA、蛋白相对表达水平较对照组、空载组明显增加(P<0.01)。对照组与空载组细胞周期时相分布差异无统计学意义(P>0.05),实验组细胞较对照组、空载组G0/G1期百分比明显增加(P<0.01);G2/M、S期明显减少(P<0.01)。结论成功构建人源CerS2重组腺病毒且过表达的CerS2导致肝癌细胞HepG2细胞周期G0/G1期阻滞,其机制可能是通过上调p27从而抑制肝癌细胞的生长与增殖。
关键词:神经酰胺合酶;重组腺病毒;细胞周期;p27;激光扫描共聚焦显微镜;
基金:贵州省科学技术基金资助项目[黔科合基础(2016)1174; ;黔科合J字LKZ(2011)32; ;遵市科合社字(2011)20号]; ;

参考文献:
[1]Ethanol extract of Kalopanax septemlobus leaf inhibits HepG2 human hepatocellular carcinoma cell proliferation via inducing cell cycle arrest at G1 phase[J]. Cheol Park,Ji-Suk Jeong,Jin-Woo Jeong,Sung Ok Kim,Yong-Joo Kim,Gi-Young Kim,Su-Hyun Hong,Yung Hyun Choi. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(04)
[1]p27 Kip1 signaling: Transcriptional and post-translational regulation[J] . Su Su Thae Hnit,Chanlu Xie,Mu Yao,Jeff Holst,Alan Bensoussan,Paul De Souza,Zhong Li,Qihan Dong. International Journal of Biochemistry and Cell Bi . 2015
[2]Ceramides – Lipotoxic Inducers of Metabolic Disorders[J] . Bhagirath Chaurasia,Scott A. Summers. Trends in Endocrinology & Metabolism . 2015 (10)
[3]Regulating the stability and localization of CDK inhibitor p27Kip1 via CSN6-COP1 axis[J] . Hyun Ho Choi,Sergei Guma,Lekun Fang,Liem Phan,Cristina Ivan,Keith Baggerly,Anil Sood,Mong-Hong Lee. Cell Cycle . 2015 (14)
[4]Inhibition of osteosarcoma cell progression by MacroH2A via the downregulationof cyclin D and cyclin?dependent kinase genes[J] . Pu Yang,Ke Yin,Da Zhong,Qiande Liao,Kanghua Li. Molecular Medicine Reports . 2015 (3)
[5]The negative cell cycle regulators, p27Kip1, p18Ink4c, and GSK-3, play critical role in maintaining quiescence of adult human pancreatic β-cells and restrict their ability to proliferate[J] . Jeffrey Stein,Wieslawa M Milewski,Arunangsu Dey. Islets . 2013 (4)
[6]Ceramides as modulators of cellular and whole-body metabolism[J] . Bikman, Benjamin T,Summers, Scott A. Journal of Clinical Investigation . 2011 (11)
[1] Mammalian Lass6 and its related family members regulate synthesis of specific ceramides. Mizutani Yukiko,Kihara Akio,Igarashi Yasuyuki. The Biochemical Journal . 2005
[2] The asialoglycoprotein receptor suppresses the metastasis of hepatocellular carcinoma via LASS2-mediated inhibition of V-ATPase activity. Gu D,Jin H,Jin G,et al. Cancer Letters . 2016
[3] Ceramide synthase 5 is essential to maintain C16:0 ceramide pools and contributes to the development of diet induced obesity. Gosejacob D,Jager PS,Vom Dorp K,et al. Journal of Biological Chemistry . 2016
[4] LASS2 enhances chemosensitivity of breast cancer by counteracting acidic tumor microenvironment through inhibiting activity of V-ATPase proton pump. Fan S,Niu Y,Tan N,et al. Oncegene . 2013
[5] LASS2inhibits growth and invasion of bladder cancer by regulating ATPase activity. Wang H,Zuo Y,Ding M,et al. Oncol Lett . 2017
[6] p27kip1 An all-round tumor suppressor. Belletti B,Fabris L,Baldassarre G. Molecular&Cellular Oncology . 2016
[7] Enzyme activities of the ceramide synthases CERS2-6are regulated by phosphorylation in the c-terminal region. SASSA T,HIRAYAMA T,KIHARA A. Journal of Biological Chemistry . 2016
[8] Changes in ceramide metabolism are essential in Madin-Darby canine kidney cell differentiation. GISELE PESCIO L,JAIME SANTACREU B,GISELA LOPEZ V,et al. Journal of Lipid Research . 2017

  • 肺结节的外科治疗策略

    作者:李何子;汪天虎; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    肺结节是最常见的影像学改变之一。随着健康检查的普及,越来越多的肺结节特别是肺小结节被发现,这些体检发现的肺结节不但让患者高度紧张,也一度困扰医务人员。为了规范化地进行随访和治疗,近年国内外已出台了很多指南和专家共识。肺结节是否应该进行外科治疗,需要临床专科医生按照指南来进行规范和详细地评估。对于明确需要手术的患者,目前提倡精准化、微创化和个性化的进行治疗。为了更好地把握肺结节的手术适应证、手术策略和选择合适的手术方式,本文就此进行相关概述。
    关键词:结节病,肺;胸外科手术,电视辅助;成像,三维;指南;

    指南

  • 早期肺腺癌患者预后及早期复发病理特征的研究

    作者:陈志彪;刘杰;张亮;李梦侠;卢先锋;肖华亮;杨宇馨;戴楠;单锦露;王东; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 术后复发转移是早期肺腺癌治疗失败的主要原因,探寻其临床病理特征有利于筛选预测复发转移的高危患者。方法 随访分析157例手术治疗、病理确诊为早期肺腺癌患者的整体复发及生存时间,重点探讨早期复发患者的临床病理特征。结果 157例早期肺腺癌患者的中位无复发生存(RFS)时间为55.0个月,1、2和5年RFS率分别为86.0%、75.8%和45.0%;总生存率分别为98.1%、96.0%和84.1%。157例早期肺腺癌患者中,69例复发转移,其中1年内早期复发者为22例(14.0%)。统计分析结果显示,肿瘤大小、组织学亚型是影响早期肺腺癌术后患者RFS的危险因素(P<0.05),低分化和非贴壁为主型可能是早期复发患者的病理学特征。结论 肿瘤直径大于2cm、非贴壁为主型和低分化可能是预测早期肺腺癌复发与早期复发的重要因素。
    关键词:肺腺癌;预后;早期复发;

    肺腺癌预后早期复发

  • 当归红芪超滤物对顺铂诱导大鼠肾足细胞损伤的保护作用研究

    作者:李竺娟;寇炜;朱琳菊;孙少伯;马桂兰; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 探究当归红芪超滤物(RAS-RH)对顺铂体外诱导大鼠肾足细胞损伤的保护作用。方法本实验选取大鼠肾足细胞分为对照组、药物组、顺铂组及联合组,采用倒置相差显微镜观察顺铂对大鼠肾足细胞生长的影响,利用实时细胞分析技术监测给予RAS-RH前、后细胞的生长指数(CI),流式细胞仪检测大鼠肾足细胞的凋亡率。结果 顺铂对大鼠肾足细胞生长增殖具有明显抑制作用,联合组对顺铂诱导的大鼠肾足细胞损伤具显著的保护作用;流式细胞仪显示,联合组大鼠肾足细胞凋亡率明显低于顺铂组凋亡率(P<0.05)。结论 RAS-RH对顺铂诱导的体外大鼠肾足细胞损伤具有明显的保护作用。
    关键词:当归红芪超滤物;大鼠肾足细胞;顺铂;凋亡;

    当归红芪超滤物顺铂凋亡

  • 花粉症患者伴发口腔过敏综合征的临床特征及危险因素分析

    作者:王晓艳;李晓荣;庄严;石海云;王学艳; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 探讨花粉症患者伴发口腔过敏综合征(OAS)的临床特征及危险因素。方法 205例花粉症患者纳入研究,接受面对面问卷调查并进行过敏原皮肤点刺试验(SPT),进行统计分析。结果 花粉症患者中OAS发病率为27.3%(56/205)。OAS组出现呼吸道症状的概率显著高于非OAS组(33.9%vs.16.1%,P=0.005),OAS组由鼻部进展为眼部症状的平均年限为(0.88±0.25)年,显著低于非OAS组[(1.57±0.35)年,P=0.037]。OAS组生活质量评分为(3.54±0.12)分,显著高于非OAS组[(3.19±0.06)分,P=0.007]。OAS组共自报111次食物过敏原。最常见的致敏食物依次为苹果(25.2%)、桃子(17.1%)。结论 OAS患者更易出现呼吸道受累,生活质量更易受到影响。
    关键词:鼻炎,变应性,季节性;口腔过敏综合征;食物过敏;危险因素;疾病病程;

    食物过敏危险因素

  • 富血小板血浆对小鼠下肢缺血血管生成的作用研究

    作者:袁园;张潇;邵菊;孙芳;李蓉; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 探究富血小板血浆(PRP)促进下肢缺血血管新生的作用与机制。方法 12只C57BL/6J小鼠在下肢缺血术后,将其分为两组,用多普勒血流扫描仪在不同时间节点扫描记录下肢的血流灌注情况;术后14d收集小鼠腓肠肌来评价肌肉中血管新生,同时检测血管内皮细胞生长因子(VEGF-A)、血小板衍生生长因子(PDGF-BB)的表达。结果 研究发现,PRP组小鼠下肢缺血部位血流恢复明显,缺血侧肌肉中CD31和α-SMA表达存在差异,且VEGF-A、PDGF-BB的表达存在显著性差异(P<0.05)。结论 PRP能促进缺血下肢的血管形成,促进其血流恢复。
    关键词:下肢缺血;血管形成;富血小板血浆;

    下肢缺血血管形成富血小板血浆

  • 白藜芦醇对糖尿病大鼠视网膜Muller细胞凋亡的防护作用及分子机制研究

    作者:曾凯宏;王元;邓波;余雪梅;宋怡;周雪;黄璐娇; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 视网膜Muller细胞凋亡发生在糖尿病视网膜病变(DR)早期,探讨自藜芦醇在DR早期Muller凋亡中的重要意义。方法 5、10mg·kg-1·d-1白藜芦醇喂养健康和糖尿病大鼠1~7个月后取材,使用TUNEL检测Muller细胞凋亡,免疫荧光检测转录因子特异蛋白1(SP1)细胞定位,qRT-PCR检测miR-29b和SP1基因表达,Western blot检测SP1蛋白表达。结果 糖尿病1、3、5和7个月大鼠视网膜中均检测到TUNEL阳性细胞,白藜芦醇干预能有效抑制糖尿病引起的大鼠视网膜内核层(INL)Muller细胞凋亡(P<0.01)。与年龄相匹配的健康对照大鼠相比,糖尿病大鼠视网膜中miR-29b的表达显著降低,SP1表达显著增高(P<0.01),糖尿病引起的miR-29b表达下调和SP1表达上调均能被白藜芦醇干预抑制(P<0.05)。结论白藜芦醇是一个潜在的治疗DR的选择,miR-29b/SP1信号通路在白藜芦醇的抗凋亡机制中起重要作用。
    关键词:白藜芦醇;糖尿病视网膜病变;Muller细胞;细胞凋亡;微小RNA-29b;特异性蛋白1;

    白藜芦醇糖尿病视网膜病变Müller细胞细胞凋亡

  • miR-34a对乳腺癌细胞增殖与侵袭的影响

    作者:冯刚;李良平;樊友本;刘志苏; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 研究miR-34a对乳腺癌细胞生物学功能的影响及其作用机制,为乳腺癌的诊治提供理论依据。方法 实时荧光定量PCR法检测miR-34a在乳腺癌细胞系中的表达,CCK8法、Transwell实验检测miR-34a对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响,双荧光素酶法和Western blot法对靶基因Wnt1进行验证,并检测其下游基因β-catenin、CyclinD1的表达。结果 miR-34a抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭能力,Wnt1蛋白为miR-34a的直接作用靶点,过表达miR-34a可直接抑制Wnt1蛋白的表达,下游基因β-catenin、CyclinD1也受到抑制。结论 miR-34a直接靶向作用于Wnt1蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。
    关键词:乳腺肿瘤;miR-34a;Wnt1;细胞增殖;肿瘤侵润;

    乳腺肿瘤miR34aWnt1细胞增殖肿瘤侵润

  • 芦丁对梗阻性肾病大鼠肾脏氧化应激损伤及Nrf2/HO-1通路的影响

    作者:王斌;赵明;陈志勇;赖永通;郭雪坤;黄先恩;赵国志;蔡瑞明;林民专; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 探讨芦丁对梗阻性肾病大鼠肾脏氧化应激损伤及Nrf2/HO-1通路的影响。方法 雄性Wistar大鼠分为4组:假手术组、芦丁治疗假手术组、模型组、芦丁治疗模型组。术后24h,芦丁治疗假手术组和芦丁治疗模型组给予芦丁[100mg·kg-1·d-1溶于1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液]灌胃,其他两组给予等体积的1%CMC-Na溶液灌胃。术后2周处死全部大鼠,取梗阻侧肾组织测定脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾脏病理改变,免疫组织化学方法检测肾组织内血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。Western blot方法检测肾组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)和HO-1蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组肾脏病理损害明显加重,肾组织内MDA水平明显增加(P<0.05),SOD及GSH-Px活性明显降低(P<0.05),Nrf2与HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,芦丁治疗模型组肾脏病理损害明显减轻,肾组织内MDA水平明显减少(P<0.05),SOD及GSH-Px活性明显升高(P<0.05),Nrf2与HO-1蛋白表达水平进一步升高(P<0.05)。结论 芦丁可减轻梗阻性肾病大鼠肾脏氧化应激损伤,此效应可能是通过介导Nrf2/HO-1信号通路实现。
    关键词:芦丁;梗阻性肾病;氧化性应激;血红素加氧酶-1;核因子E2相关因子2;

    芦丁梗阻性肾病氧化性应激血红素加氧酶1核因子E2相关因子2

  • 激活AMPK对妊娠高血压大鼠HO-1水平、血压和尿蛋白的影响

    作者:叶海琼;傅晓冬;钟华; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 探讨激活AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)对妊娠高血压大鼠的保护作用。方法 建立妊娠高血压大鼠模型,用AMPK特异性激动剂阿卡地新(AICAR)干预后,分为正常妊娠组、亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组、L-NAME+AICAR组,测量大鼠血压,ELISA测定24h尿蛋白,胎盘组织苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学检测AMPK、血红素氧合酶-1(HO-1)表达的细胞定位,Western blot检测胎盘组织AMPK、HO-1表达水平。结果 与正常妊娠组孕鼠比较,L-NAME组孕鼠血压升高,24h尿蛋白水平显著增加,AMPK、HO-1表达水平降低(P<0.05)。与L-NAME组比较,L-NAME+AICAR组血压降低,24h尿蛋白减少,AMPK、HO-1表达水平升高(P<0.05)。结论 激活AMPK可提高妊娠高血压大鼠HO-1水平、降低血压及减少24h尿蛋白。
    关键词:高血压,妊娠性;AMP依赖的蛋白激酶;血红素氧合酶-1;24小时尿蛋白;

    AMP依赖的蛋白激酶血红素氧合酶124小时尿蛋白

  • 新疆某三甲医院慢性肾衰竭住院患者的病因构成分析

    作者:郑笑;谢大星;陆晨;张长荣;杨淑芬; 期刊:《重庆医学》 2019年2期

    目的 分析新疆地区慢性肾衰竭(CRF)住院患者的病因构成变化,为疾病的预防和诊治提供一定的依据。方法 收集新疆维吾尔自治区人民医院肾病科2010年1月1日至2017年12月30日诊断为CRF的9 850例患者病案资料,并分析数据。结果 近8年CRF患者的例数呈上升趋势,男女比例为1.14∶1.00,汉族和维吾尔族构成患者的主要部分(86.69%),年龄集中在45~59岁(52.52%)。CRF患者的病因构成主要为慢性肾小球肾炎、IgA肾病、膜性肾病、糖尿病肾病和高血压肾病等,其中慢性肾小球肾炎居于首位,IgA肾病有下降趋势,而膜性肾病、糖尿病肾病和高血压肾病则呈上升趋势。不同性别、民族和年龄阶段的病因构成和顺位存在明显差异且具有统计学意义(P<0.05)。结论 CRF患者的病因构成因性别、民族、年龄的不同而发生变化。
    关键词:肾功能衰竭,慢性;病因构成;住院病人;肾病;

    病因构成住院病人肾病

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